Luận văn Xác định các đột biến trên gen KATG liên quan đến tính kháng thuốc isoniazid của một số chủng vi khuẩn lao tại Việt Nam

MỤC LỤCMƠ ̉ ĐÂ ̀ U:. 1CHưƠNG 1: TÔ ̉ NG QUAN TA ̀ I LIÊ ̣ U . 31.1. Tình hình bệnh lao . 31.1.1. Tình hình bệnh lao trên thế giới . 31.1.2. Tình hi ̀ nh bê ̣ nh lao ơ ̉ Viê ̣ t Nam . 51.1.3. Tình hình lao kháng thuốc . 81.2. Vi khuâ ̉ n lao . 101.2.1. Đặc điểm phân loại . 101.2.2. Đặc điểm hình thể . 101.2.3. Khả năng gây bệnh . 101.2.4. Hê ̣ gen cu ̉ a vi khuâ ̉ n lao . 111.3. Gen KatG va ̀ ti ́ nh kha ́ ng thuô ́ c isoniazid ơ ̉ vi khuâ ̉ n lao . 121.4. Châ ̉ n đoa ́ n vi khuâ ̉ n lao kha ́ ng Isoniazid . 12CHưƠNG 2: ĐỐI TưỢNG , VÂ ̣ T LIÊ ̣ U VA ̀ PHưƠNG PHA ́ PNGHIÊN Cư ́ U . 142.1. Đối tượng nghiên cứu . 142.2. Vâ ̣ t liê ̣ u thiê ́ t bi ̣ va ̀ du ̣ ng cu ̣ nghiên cư ́ u . 152.2.1. Các sinh phâ ̉ m ho ́ a châ ́ t chi ́ nh . 152.2.2. Các máy và thiết bị chính . 162.2.3. Các mồi dùng trong nghiên cứu . 162.3. Phương pha ́ p nghiên cư ́ u . 172.3.1. Thiê ́ t kê ́ nghiên cư ́ u . 172.3.2.1. Kỹ thuật nhân bản đoạn gen katG sử dụng mồi đặc hiệu . 182.3.2.3. Phương pha ́ p đo ̣ c tri ̀ nh tư ̣ DNA theo Sanger trên ma ́ yđo ̣ c tri ̀ nh tư ̣ tư ̣ đô ̣ ng phân ti ́ ch kê ́ t qua ̉ bă ̀ ng ca ́ c phâ ̀ n mê ̀ m chuyên du ̣ ng . 24 CHưƠNG 3: KÊ ́ T QUA ̉ NGHIÊN Cư ́ U VA ̀ THA ̉ O LUÂ ̣ N . 253.1. Kê ́ t qua ̉ nhân bản gen katG các chủng vi khuẩn lao nghiên cứu . 253.2. Kê ́ t qua ̉ biê ́ n na ̣ p vector ta ́ i tô ̉ hơ ̣ p va ̀ o tê ́ ba ̀ o kha ̉ biê ́ n E . coli DH5α . 263.3. Kê ́ t qua ̉ ta ́ ch do ̀ ng gen katG . 28KÊ ́ T LUÂ ̣ N VA ̀ KIÊ ́ N NGHI ̣ . 421. Kê ́ t luâ ̣ n . 421.1. Nhân ba ̉ n tha ̀ nh công gen katG tư ̀ ca ́ c chu ̉ ng vi khuâ ̉ n lao . 421.2. Đột biến trên gene katG liên quan đến tính kháng Isoniazid ởvi khuâ ̉ n lao . 422. Kiê ́ n nghi ̣ . 42

MỤC LỤC

MƠ ̉ ĐÂ ̀ U:. 1

CHưƠNG 1: TÔ ̉ NG QUAN TA ̀ I LIÊ ̣ U . 3

1.1. Tình hình bệnh lao . 3

1.1.1. Tình hình bệnh lao trên thế giới . 3

1.1.2. Tình hi ̀ nh bê ̣ nh lao ơ ̉ Viê ̣ t Nam . 5

1.1.3. Tình hình lao kháng thuốc . 8

1.2. Vi khuâ ̉ n lao . 10

1.2.1. Đặc điểm phân loại . 10

1.2.2. Đặc điểm hình thể . 10

1.2.3. Khả năng gây bệnh . 10

1.2.4. Hê ̣ gen cu ̉ a vi khuâ ̉ n lao . 11

1.3. Gen KatG va ̀ ti ́ nh kha ́ ng thuô ́ c isoniazid ơ ̉ vi khuâ ̉ n lao . 12

1.4. Châ ̉ n đoa ́ n vi khuâ ̉ n lao kha ́ ng Isoniazid . 12

CHưƠNG 2: ĐỐI TưỢNG , VÂ ̣ T LIÊ ̣ U VA ̀ PHưƠNG PHA ́ P

NGHIÊN Cư ́ U . 14

2.1. Đối tượng nghiên cứu . 14

2.2. Vâ ̣ t liê ̣ u thiê ́ t bi ̣ va ̀ du ̣ ng cu ̣ nghiên cư ́ u . 15

2.2.1. Các sinh phâ ̉ m ho ́ a châ ́ t chi ́ nh . 15

2.2.2. Các máy và thiết bị chính . 16

2.2.3. Các mồi dùng trong nghiên cứu . 16

2.3. Phương pha ́ p nghiên cư ́ u . 17

2.3.1. Thiê ́ t kê ́ nghiên cư ́ u . 17

2.3.2.1. Kỹ thuật nhân bản đoạn gen katG sử dụng mồi đặc hiệu . 18

2.3.2.3. Phương pha ́ p đo ̣ c tri ̀ nh tư ̣ DNA theo Sanger trên ma ́ y

đo ̣ c tri ̀ nh tư ̣ tư ̣ đô ̣ ng phân ti ́ ch kê ́ t qua ̉ bă ̀ ng ca ́ c phâ ̀ n mê ̀ m chuyên du ̣ ng . 24

CHưƠNG 3: KÊ ́ T QUA ̉ NGHIÊN Cư ́ U VA ̀ THA ̉ O LUÂ ̣ N . 25

3.1. Kê ́ t qua ̉ nhân bản gen katG các chủng vi khuẩn lao nghiên cứu . 25

3.2. Kê ́ t qua ̉ biê ́ n na ̣ p vector ta ́ i tô ̉ hơ ̣ p va ̀ o tê ́ ba ̀ o kha ̉ biê ́ n E . coli

DH5α . 26

3.3. Kê ́ t qua ̉ ta ́ ch do ̀ ng gen katG . 28

KÊ ́ T LUÂ ̣ N VA ̀ KIÊ ́ N NGHI ̣ . 42

1. Kê ́ t luâ ̣ n . 42

1.1. Nhân ba ̉ n tha ̀ nh công gen katG tư ̀ ca ́ c chu ̉ ng vi khuâ ̉ n lao . 42

1.2. Đột biến trên gene katG liên quan đến tính kháng Isoniazid ở

vi khuâ ̉ n lao . 42

2. Kiê ́ n nghi ̣ . 42